Jorge Sztein es Médico Veterinario de la Universidad Nacional de La Plata y Doctor en Ciencias de la misma Universidad con especialidad en Animales de Laboratorio (1991). Luego de estar en la Academia Nacional de Medicina (1987-1989), comienza como post doctorando en 1990 en el NIH (Institutos Nacionales de la Salud de los EEUU) creando animales transgénicos realizando técnicas de criopreservacion. En 1995 lo contrata los laboratorios Jackson como jefe de investigación en criobiología y comienza a actuar como profesor en cursos del instituto, en USA, Italia, Francia y España. En el año 2000 vuelve al NEI-NIH como director del manejo de colonias y criopreservación y luego en el 2008 pasa a otro instituto (NIAID) como director de  criopreservación y reproducción asistida. Actualmente está retirado del mundo de la Ciencia a nivel proresional.

Jorge nos ha colaborado en los siguientes temas:

1. Congelacion de embriones, esperma y ovarios.
2. Fertilización in vitro (FIV)

Jorge ya no estará respondiendo consultas para la web pero dejaremos sus respuestas para que sirvan de consulta para todo el ambiente científico.

Consulta:

Mi consulta es sobre la vitrificación simple de embriones de ratón, en el procedimiento que figura en el manual de Técnicas de Ingeniería reproductivas del Ratón, manual técnico de Naomi Nakagata y traducido por el Dr. Jorge Sztein, en la página 54 describe los materiales y equipos a utilizar, al comenzar el procedimiento de la vitrificación, indica filtrar la solución 1M DMSO y colocar 4 gotas de 100 microlitros para lavar los embriones sacados del medio de recolección, mientras que las otras gotas son para contener los embriones lavados, pero no menciona el tiempo de lavado en DMSO,  un tiempo prudente por la toxicidad del DMSO, como mínimo y máximo de tiempo, ¿cuál sería el óptimo?
Luego en la pagina 56 y 57 del manual, en el proceso de recuperación de embriones vitrificados, el proceso de recuperación de embriones utiliza una solución de sacarosa 0,25 M precalentada previamente, se recupera los embriones y se los coloca en una placa con 3 gotas de KSOM/AA de 100 microlitro cada gota e indica cubrirlo con aceite mineral y colocar la placa en el incubador a 37 grados, 5% CO2, por 30 minutos.
En este punto se puede reemplazar el KSOM/AA, para los lavados de los embriones por M2 de sigma? y para la incubación por M16 de sigma?, cuáles serían las ventajas de utilizar KSOM/AA con respecto a M2 y M16 ?

Respuesta:

En la pregunta: indica filtrar la solución 1M DMSO y colocar 4 gotas de 100 microlitros para lavar los embriones sacados del medio de recolección, mientras que las otras gotas son para contener los embriones lavados, pero no menciona el tiempo de lavado en DMSO, un tiempo prudente por la toxicidad del DMSO, como mínimo y máximo de tiempo, ¿cuál sería el óptimo?
 La solución con DMSO es muy densa en comparación con un medio “ fisiológico”, por lo cual en la primer gota le debes dar el tiempo para que el embrion se equilibre con el nuevo medio y llegue al fondo de la gota. Una vez cumplido este requisito ya puedes comenzar el lavado en las gotas subsiguientes, por lo que en realidad son solo segundos.
Con respecto a la segunda pregunta en referencia a los medios, no hay dudas que el KSOM/aa es el mejor medio que puedes utilizar para el cultivo de los embriones. El M2 no es un medio de cultivo, si no que es un medio especializado que contiene HEPES para mantener los embriones fuera del incubador por lo cual es ideal para poner los embriones descongelados que van a ser transferidos inmediatamente. El M16….es cosa del pasado…
Espero haber contestado tus dudas,
suerte,