Superovulación ratón
Tips 19 April 2013Consiste en la inyección de hormonas (Gonadotropinas) a hembras sexualmente maduras, con el fin de estimular la producción de un mayor número de folículos que en condiciones normales. Se utiliza en experimentos que requieren un gran número de embriones preimplantados. La madurez sexual de las hembras está determinada por el estado nutricional, estado de salud y la edad, que generalmente fluctúa de 3 a 6 semanas de edad y va a depender de la cepa utilizada. Las hembras a utilizar deben encontrarse en buen estado de salud y su peso debe estar entre el rango promedio de la cepa en cuestión.
Hormonas:
Las hormonas utilizadas son PMSG (Pregnant mare`s serum gonadotropin) y hCG (human chorionic gonadotropin), ambas provistas comercialmente en forma liofilizada por lo que deben ser resuspendidas en PBS o agua destilada estéril a una concentración de 50 UI/ml; almacenar en alícuotas congeladas (-20ºC) hasta su uso.
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| PMSG | hCG |
Procedimiento:
PMSG se utiliza para inducir la maduración de los ovocitos en el ovario (imita efecto de FSH) y debe inyectarse i.p 0,1 ml de la solución de 50 UI/ml por hembra (5 UI, dosis recomendada para la mayoría de las cepas). hCG se utiliza para inducir la ovulación (imita efecto de LH), el intervalo óptimo entre ambas hormonas es de 42 a 48 horas para adelantarse a la producción de LH endógena estimulada por la administración de PMSG. Se inyecta i.p 0,1 ml de la solución de 50 UI/ml de hCG por hembra (5 UI).
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| Inyección Intraperitoneal | |
IMPORTANTE: Inyectar correctamente, NO provocar daño de órganos. Evitar extravasación de líquido y usar inmediatamente las hormonas descongeladas, NO recongelar.
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| Ovario de hembra superovulada |
La hora de administración de hormonas se realiza de acuerdo al ciclo luz-oscuridad de los ratones. Se estima que la ovulación ocurre entre 10 y 13 horas después de la inyección de hCG, entonces, para un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas (ej: 8 am. a 8 pm.) el horario de inyección, por ejemplo, sería el siguiente: inyectar PMSG a las 3 pm. y luego hCG 46 a 48 horas más tarde alrededor de la 1 p.m. Luego de inyectar hCG las hembras se aparean con machos stud o padrillos, mantenidos en jaulas individuales y en buenas condiciones de salud. El éxito de la superovulación depende de todos los factores nombrados, estado y condición de los animales (ciclo luz-oscuridad), preparación, dosis y horarios de inyección de las hormonas, por lo que debe ser determinado empíricamente en cada laboratorio.
Nota: Marta Treimun
Fotos: Marta Treimun
Colaboracion: Viviana Bustos
Comentarios
Buenas tardes, quisiera saber si la dosis es la misma en el caso de ratas Sprague Dawley, no consigo bibliografía donde me indiquen la dosis para estas ratas
Buenas tardes, quisiera saber si la dosis es la misma en el caso de ratas Sprague Dawley, no consigo bibliografía donde me indiquen la dosis para estas ratas
Buenas dias, estoy buscando por este producto la materia prima PMSG – alguien sabe donde puedo encontrar esta materia ?
Gracias